Буфер Trometamol основания 77-86-1 Tris биологический

Трис База 77-86-1 Биологический буфер Трометамол

Использование Tris Buffer в белковом электрофорезе и Western Blotting

Большинство гелей SDS-PAGE, работающих буферов и буферных буферов буферизированы с помощью Tris.Все общие буферы доступны в предварительной смеси.Или, если вы предпочитаете делать свой собственный буфер Триса, вы можете начать с очищенного порошка Триса, глицина, и других молекулярных биологических буферных реагентов.

Большинство гелей SDS используют дискontinue Tris буферную систему. Складывающий гель, который имеет большие поры, чтобы более крупные пептиды могли легко мигрировать через, обычно сформулирован при pH 6,7 ≈ 6.8При таком pH ионизированные ионы хлорида быстро мигрируют, поднимая pH за ними и создавая градиент напряжения с зоной низкой проводимости.который заставляет глицин (из текущего буфера) ионизироваться и мигрировать за хлоридный фронтБольшинство пептидов в образце, которые имеют отрицательный заряд из-за связанного SDS, мигрируют между хлоридом и глицином, образуя узкую полосу и, таким образом, становятся "наложенными".

После того, как стек достигает геля, который находится на более высоком рН (обычно рН 8,7−8,8), повышенная ионизация глицина заставляет его ускоряться и обгонять пептиды.меньший размер поров режущего геля начинает оказывать ситовое действие, что приводит к разделению пептидов по размеру.

Большинство западных протоколов использовать Tris буфер с низкой ионной прочностью для передачи белка. Время передачи зависит от типа аппарата и диапазона размера пептида.

Использование Tris Buffer в электрофорезе нуклеиновой кислоты агарозы

Трисовые буферы широко используются для электрофореза ДНК-агарозы.Хотя есть некоторые различия в разрешении различных форм ДНК и их подвижности во время электрофорезаБоратные ионы в TBE ингибируют многие ферменты, поэтому без проведения некоторой очистки ДНК после электрофореза,Некоторые манипуляции с помощью ферментов могут не работать.Поэтому буфер TAE предпочтителен для повседневного использования в большинстве ДНК-лабораторий.

Создание буфера Трис

Трис-буфер является хорошим выбором для большинства биологических систем, поскольку его pKa составляет приблизительно 8,1 при 25°C, что делает его эффективным буфером в диапазоне pH 7 ≈ 9.Этот диапазон рН подходит для большинства биологических процессовТрис порошок также дешевле и прочнее, чем более специализированные буферы, такие как HEPES.

Есть два способа сделать буферный раствор Триса. Один из них - сделать растворы из трисовой основы и трисовой кислоты, обе в желаемой концентрации,и затем добавлять аликвоты одного раствора (обычно Tris HCl) в другой (обычно Tris base) раствор, контролируя pH до получения правильного pHНа практике это делается очень редко.

Обычный метод изготовления большинства широко используемых буферов Триса состоит в том, чтобы начать с только основы Триса.и затем буфер составляется до желаемого объемаПри условии, что при регулировании pH не происходит перенапряжения, этот метод не изменяет ионную прочность.или с использованием Tris HCl и корректировкой pH с NaOHВ зависимости от предполагаемого использования буфера Tris, такое изменение может быть или не быть важным.

При изготовлении буфера Tris важно использовать электроды, совместимые с Tris, при регулировании pH.Односоединенные электроды Ag/AgCl могут проявлять нестабильность при использовании с буферами Tris, потому что серебро постепенно осаждает и забивает электродИспользование двойных соединений или каломельных эталонных электродов обеспечивает точное измерение pH в буфере Tris.