Буфер Trometamol основания 77-86-1 Tris биологический

Буфер Trometamol основания 77-86-1 Tris биологический

Пользы буфера Tris в электрофорезе протеина и западном закрывать

Буфера Tris объединенные к электрофорезу протеина и западному закрывать. Большинств гели SDS-PAGE, бежать буфера, и закрывать буфера амортизированы с Tris. Все общие буфера доступный смешаны заранее, или, если вы предпочитаете сделать ваш собственный буфер Tris, то вы можете начать с очищенным порошком Tris, глицином, и другими реагентами буфера ранга молекулярной биологии.

Большинств гели SDS используют прерывную систему буфера Tris. Штабелируя гель, который имеет большие поры так, что более большие пептиды смогут легко проникнуть до конца, обычно сформулирован на пэ-аш 6.7-6.8. На этом пэ-аш, ионизированные ионы хлорида проникают быстро, поднимающ пэ-аш за ими и создающ градиент напряжения тока с зоной низкой проводимости, которая причиняет глицин (от идущего буфера) ионизировать и проникнуть за фронтом хлорида. Большинств пептиды в образце, которые имеют отрицательный заряд должный к пределу SDS, проникают между хлоридом и глицином, формируя узкодиапазон и таким образом быть «штабелированы».

Как только стог достигает разрешая гель, который на более высоком пэ-аш (типично пэ-аш 8.7-8.8), увеличенная ионизация глицина причиняет ее ускорить ход и настигнуть пептидов. Дополнительно, более небольшой размер поры разрешая геля начинает иметь фильтруя влияние, приводящ в разъединении пептидов размером.

Большинств западные закрывая протоколы используют буфер Tris низкой ионной прочности для передачи протеина. Время передачи зависит от типа закрывать прибор и ряд размера пептида интереса.

Польза буфера Tris в нуклеиновом кисловочном электрофорезе агарозы

Буфера Tris широко использованы для электрофореза агарозы ДНК. 2 основных буфера TBE (Tris borate/EDTA) и TAE (Tris acetate/EDTA). Хотя некоторые разницы в разрешении различных форм ДНК и их подвижности во время электрофореза, эти буфера Tris можно вообще использовать взаимозаменимо. Ионы бората в TBE блокируют много энзимов, так без выполнять некоторый тип очищения ДНК после электрофореза, некоторые энзим-посредничанные идущие дальше по потоку манипуляции не могут работать. Поэтому, буфер TAE благоволить ко для ежедневной пользы в большинств лабораториях ДНК.

Делать буфер Tris

Буфер Tris хороший выбор для большинств биологических систем потому что он имеет pKa приблизительно 8,1 на 25°C, делая им эффективный буфер в границах пэ-аш 7-9. Этот ряд пэ-аш соответствующий для большинства биологических процессов. Порошок Tris также более менее дорог и крепче чем более специализировать буфера как HEPES.

2 пути сделать буфферное разрешение проблемы Tris. Одно сделать решения основания Tris и HCl Tris, и на пожеланной концентрации, и после этого добавляет аликвоты одного решения (обычно HCl Tris) к другому (обычно решению основания Tris) пока контролирующ пэ-аш до тех пор пока правильный пэ-аш не будет получен. На практике, это очень редко сделано.

Обычный образ делать большую часть обыкновенно используемых буферов Tris начать с только основанием Tris. Соотвествующее количество порошка Tris растворено в воде, пэ-аш отрегулирован с HCl, и после этого буфер составлен к пожеланному тому. Высказывать предположение о том, что там никакое превышение пока регулирующ пэ-аш, этот метод не изменяет ионную прочность. Однако, после превышения и подрегулировать с NaOH, или использования HCl Tris и регулировать пэ-аш с NaOH, изменение в ионной прочности. В зависимости от предполагаемого использования буфера Tris, такое изменение может или не может быть важно.

Делая буфер Tris, важно использовать Tris-совместимый электрод регулируя электроды Одно-соединения Ag/AgCl PH. могут показать нестабильность при использовании с буферами Tris потому что серебр постепенно осаждает и закупоривает электрод. Польза электродов ссылки двух-соединения или каломели обеспечивает точные измерения пэ-аш в буфере Tris.